SweAgarose-eiwit Een antilichaam-gezuiverde agarose

 

Productnaam	Kat. Nee.	Spec.
SweAgrose Protein A Antilichaam Gezuiverde agarose	G2206-1ML	1 ml
	G2206-5ML	5 ml

 

 

Proteïne A is een celwandoppervlakte-eiwit dat wordt aangetroffen in Staphylococcus aureus met een molecuulgewicht van 42 kDa. Proteïne G is een immunoglobulinebindend eiwit dat tot expressie wordt gebracht door streptokokkenbacteriën (C of G). Proteïne A en Proteïne G zijn functioneel vergelijkbaar en kunnen specifiek binden aan zoogdierimmunoglobuline (Ig). Recombinant Proteïne A en G met geschikte modificaties gebonden aan agarose kunnen worden gebruikt voor immunoprecipitatie of antilichaamzuivering. Eiwit A-agarose is geschikt voor het binden van menselijk IgG1, IgG2, IgG4, muis IgG2a, IgG2b, enz., terwijl Eiwit G-agarose geschikt is voor het binden van menselijk IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, muis IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, rat IgG1 , IgG2a, IgG2b, IgG2c en andere polyklonale antilichamen. (Zie Tabel I voor specifieke informatie)

Dit product maakt gebruik van de zelf ontwikkelde en geproduceerde proteïne A-gelabelde agarose, vergeleken met vergelijkbare producten op de markt, dit product bindt antilichamen efficiënter en heeft een lagere niet-specifieke bindingssnelheid, samen met de geoptimaliseerde buffer kan het handig en efficiënt zijn voor immunoprecipitatie-experimenten; het kan op grote schaal worden gebruikt bij de isolatie en zuivering van de doeleiwitten in monsters zoals cellysaten, supernatanten van cellulaire secretie, serum, ascites, enz.

 

 

Kenmerken	Beschrijving
Productinhoud	50% (v/v) agarose in specifieke beschermende buffer
Kralen structuur	6% verknoopte agarose
Gekoppeld eiwit	Eiwit A
MWof eiwit	~25 kDa (Eiwit A)
Bindende capaciteit	>1 mg muizenantilichaam per ml kralen
Specificiteit	Antilichamen van verschillende soorten, waaronder muizen, mensen, ratten, geiten, schapen en runderen
Kralen maat	30~150 μm
Elutiemethode	Elutie met zuur, of 1x SDS-PAGE-laadbuffer (gereduceerd) Opmerking: Indien geëlueerd met 1x SDS-PAGE-laadbuffer (gereduceerd), zullen de zware keten (~ 50 kDa) en lichte keten (~ 25 kDa) van het antilichaam worden gedenatureerd en vrijgemaakt uit de agarosekorrels.
Sollicitatie	IP, Co-IP, Eiwitzuivering

 

 

Schip met nat ijs; Bewaren bij 2-8 graad, 12 maanden geldig.

 

 

Componentnummer	Onderdeel	G2206-1ML	G2206-5ML
G2206	SweAgrose Protein A Antilichaam Gezuiverde agarose	1 ml	5 ml
Handmatig		1 st

 

 

Antilichaamzuiveringsgerelateerde reagensformuleringen verwijzen naar het volgende, de gebruiker kan worden aangepast aan specifieke experimentele omstandigheden.

Onderdeel	Reagenscombinatie
Bindende wasbuffer	PBST: 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2.0 mM KH2PO4, 0,1% Tween-20
Elutiebuffer	100 mM Gly, 0,1% Tween-20, pH 2,5
Neutralisatiebuffer	1.{1} M Tris-HCl, pH 9.{4}
Conserveringsbuffer	PBST,0,1% (v/v) Proclin 300

 

Handmatige procedure (zuivering van muisascites IgG als voorbeeld)

1. Monsterverwerking: neem 500 μl ascitesmonster, voeg de bindende wasbuffer toe om 500 μl te verkrijgen. Als er meer eiwitprecipitaten in het monster zitten, centrifugeer dan het supernatant voor experimenten, wat de zuiverheid van het antilichaam kan verbeteren.

2. Voorbehandeling met agarose: Vortex de door antilichamen gezuiverde agarose gedurende 30 seconden om voldoende te resuspenderen. Neem 100 μl van 50% (v/v) SweAgarose Protein A Antibody Purified agarose in een ander nieuw EP-buisje van 1,5 ml, centrifugeer bij 6,{{7} } xg gedurende 30 s bij 4 graden en gooi het supernatant weg, was het met 1 ml bindende wasbuffer voor tweemaal, en neem vervolgens het supernatant na magnetisch opzuigen.

Opmerking: De hoeveelheid agarose kan worden aangepast aan de hoeveelheid antilichaam in het monster.

3. Adsorptie van antilichamen: voeg het in stap 1 verwerkte monster toe aan de agarose in stap 2, vortex en meng goed, plaats de EP-buis in een roterende mixer of draai de buis handmatig voorzichtig op kamertemperatuur (ongeveer 25 graden) om de agarose te maken volledig contact met het monster, draai het gedurende 15 minuten om, centrifugeer bij 6,000 xg gedurende 30 seconden bij 4 graden en gooi vervolgens het supernatant weg.

4. Wassen van agarose: voeg 1 ml bindende wasbuffer toe aan de EP-buis, suspendeer onder schudden en centrifugeer vervolgens bij 6,000 xg gedurende 30 seconden bij 4 graden. Gooi het supernatant weg en herhaal de handeling 3 keer.

5. Elutie van antilichamen: Voeg 0,5~1.0 ml eluens toe aan de EP-buizen, waarbij de agarose is gewassen zoals hierboven beschreven, en resuspendeer de buizen snel door pipetteren of vortexen, en draai ze vervolgens voorzichtig om. draai de buizen om in een omkeermixer of met de hand bij kamertemperatuur (ongeveer 25 graden), centrifugeer bij 6,000 xg gedurende 30 seconden bij 4 graden na het omdraaien gedurende 10 minuten, en dan verzamel het supernatant in nieuwe EP-buizen.

6. Antilichaamneutralisatie: voeg in stap 5 een bepaalde hoeveelheid neutralisatieoplossing toe aan het antilichaameluaat, doorgaans 1/10 van het antilichaamelutievolume (als het antilichaameluaat bijvoorbeeld 500 μl bedraagt, is de toegevoegde hoeveelheid neutralisatieoplossing 50 μl) , zodat de pH-waarde van het geëlueerde antilichaam in een neutrale omgeving wordt gehandhaafd, wat bevorderlijk is voor het behoud van de biologische activiteit van het antilichaam en het voorkomen van antilichaaminactivatie.

7. Nabehandeling van agarose: Was de agarose na gebruik tweemaal met elutieoplossing, centrifugeer bij 6,000 xg gedurende 30 seconden bij 4 graden en gooi het supernatant weg; was vervolgens driemaal met bindende wasoplossing, centrifugeer bij 6,000 xg gedurende 30 seconden bij 4 graden en gooi het supernatant weg; Resuspendeer de agarose met 200 µl conserveringsoplossing en bewaar deze vervolgens bij 2~8 graden.

 

 

1. Lees deze instructies zorgvuldig door voordat u doorgaat met de zuivering van de antilichamen.

2. De agarose niet invriezen of centrifugeren, aangezien dit onomkeerbare aggregatie van de agarose kan veroorzaken.

 

Tabel 1

Soort	Ig	Eiwit A	Eiwit G	Totaal Ig	Eiwit A	Eiwit G
Menselijk	IgG1	++++	++++	Menselijk	++++	++++
	IgG2	++++	++++	Muis	+++	+++
	IgG3	-	++++	Rat	+/-	++
	IgG4	++++	++++	Konijn	++++	+++
	IgA	++	-	Geit	-	++
	IgD	++	-	Kip	-	+
	IgE	++	-	Koe	++	++++
	IgM	++	-	Cavia	++++	++
Muis	IgG1	+	++++	Hamster	+	++
	IgG2a	++++	++++	Paard	++	++++
	IgG2b	+++	+++	Varken	+++	+++
	IgG3	++	+++	Schaap	+/-	++
	IgM	+/-	-	++++:Sterke Bing
Rat	IgG1	-	+	++~+++: Middelgrote binding
	IgG2a	-	++++	+: Zwakke binding
	IgG2b	-	++	+/-:Zwak of geen binding
	IgG2c	+	++	-:Geen binding
	IgM	+/-	-

 

Alleen voor onderzoeksgebruik. Niet voor gebruik bij diagnostische of therapeutische procedures!

 

 

Populaire tags: sweagarose-eiwit een antilichaam gezuiverde agarose, China sweagarose-eiwit een antilichaam gezuiverde agarose fabrikanten, leveranciers, fabriek