Genomische DNA-extractiekit voor weefsel/cel/bloed

 

Productnaam	Kat. Nee.	Spec.
Genomische DNA-extractiekit voor weefsel/cel/bloed	G3633-50T	50 T

 

 

Deze kit maakt genomisch DNA vrij uit weefselcellen via een speciaal geoptimaliseerde lysisbuffer, en zuivert vervolgens genomisch DNA via een specifieke DNA-bindende centrifugaalkolom. Het is geschikt voor het isoleren van genomisch DNA uit dierlijke weefsels, gekweekte cellen en volbloed. 10-30 ug zeer zuiver en compleet genomisch DNA kan snel worden geëxtraheerd en gezuiverd uit 2-30 mg dierlijke weefsels, 106-107 vers gekweekte celsuspensies en 5-100 μl volbloed zonder kern of rode bloedcellen met kern (inclusief anticoagulans). Het verkregen genomische DNA kan direct worden gebruikt voor daaropvolgende moleculair biologische experimenten zoals PCR-templates, vertering en hybridisatie.

 

 

Proteinase K en RNase A moeten worden verzonden met nat ijs en worden bewaard bij -20 graden; Andere reagentia worden verzonden en maximaal 12 maanden bij kamertemperatuur bewaard.

 

 

Componentnummer	Onderdeel	G3633-50T
G3633-1	Buffer GA	12 ml
G3633-2	Proteïnase K	1 ml
G3633-3	RNase A	200 uL
G3633-4	Buffer GB	12 ml
G3633-5	Buffer-PD	12 ml (18 ml watervrije ethanol toegevoegd vóór gebruik)
G3633-6	Buffer PW	24 ml (56 ml watervrije ethanol toegevoegd vóór gebruik)
G3633-7	Buffer TE	10 ml
G3633-8	DNA-spinkolommen	50
G3633-9	Verzamelbuizen	50
Handmatig		Eén exemplaar

 

 

1. Als zich een neerslag heeft gevormd in Buffer GA, verwarm dit dan op 65 graden totdat het neerslag volledig is opgelost en gebruik het nadat het weer op kamertemperatuur is gekomen.

2. Voeg vóór het eerste gebruik 18 ml absolute ethanol toe aan Buffer PD, voeg 56 ml absolute ethanol toe aan Buffer PW en meng afzonderlijk goed.

 

 

1. Voorbereiding van monsters

A. Haal 2-30 mg vers of bevroren dierlijk weefsel eruit, plaats dit in een centrifugebuis van 1,5 ml of een speciale maalbuis met daarin 2-3 maalkorrels (G0203-150G aanbevolen) met een diameter van 3 mm, voeg 200 μl Buffer GA toe en gebruik een weefselhomogenisator (KZ-5F-3D aanbevolen) om het weefsel grondig te vermalen tot homogenisatie bij kamertemperatuur (als het weefsel niet grondig is gehomogeniseerd, zal dit de opbrengst en kwaliteit van DNA beïnvloeden).

B. Neem 10 6-10 7 celsuspensie in een centrifugebuis van 1,5 ml, centrifugeer gedurende 5 minuten bij 1,000 rpm, zuig voorzichtig op en verwijder de supernatant met een pipet. Voeg 200 μl Buffer GA toe, meng goed met votex.

C. Neem 50-100 μl volbloed van erytrocyten zonder kern (inclusief anticoagulans) in een centrifugebuis van 1,5 ml, voeg Buffer GA-oplossing toe aan 200 μl en meng goed met votex.

Opmerking: voor het verwerken van een groter volume bloed voegt u driemaal het volume erytrocytenlysaat toe aan het monster en mengt u het ondersteboven, laat u het gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur staan, mengt u het meerdere keren ondersteboven tijdens de incubatie, centrifugeert u het op 3, 000 rpm gedurende 10 minuten, verwijder voorzichtig het supernatant met een pipet zodat het neerslag van de witte bloedcellen achterblijft, voeg 200 μl Buffer GA toe, meng goed met stemex.

D. Neem 5-20 μl volbloed van erytrocyten met kern (inclusief anticoagulans) in een centrifugebuis van 1,5 ml, voeg Buffer GA-oplossing toe aan 200 μl en meng goed met votex.

2. Voeg 20 μl Proteinase K en 4 μl RNase A toe, incubeer gedurende 30 minuten bij 56 graden (mix elke 10 minuten om de weefsellyse te versnellen).

Opmerking: Verleng de tijd voor materialen die moeilijk te lyseren zijn.

3. Centrifugeer bij 12,000 rpm gedurende 2 minuten, breng het supernatant van het weefsel over naar een nucleasevrije centrifugebuis en vermijd het opzuigen van het neerslag. (Sla deze stap over als het monster uit cellen of bloed bestaat).

4. Voeg 200 μl Buffer GB toe aan de centrifugebuis, meng ondersteboven en incubeer gedurende 10 minuten bij 70 graden.

5. Voeg 200 μl absolute ethanol toe aan de centrifugebuis, meng ondersteboven en naar beneden (eventueel zichtbaar neerslag dat zich kan vormen) en centrifugeer vervolgens bij 12,000 rpm gedurende 2 minuten bij kamertemperatuur.

6. Plaats de DNA-spinkolommen in de verzamelbuizen en breng het bovenstaande supernatant over in de DNA-spinkolommen.

7. Centrifugeer bij 12,000 rpm gedurende 30 seconden, gooi de doorstroom weg en plaats de DNA-draaikolommen terug in de verzamelbuis.

8. Voeg 500 μl Buffer PD toe aan de DNA-draaikolommen, centrifugeer gedurende 30 seconden bij 12,000 rpm en gooi de doorstroom weg.

9. Voeg 600 μl Buffer PW toe aan de DNA-spinkolommen (voeg Buffer PW toe langs de wand van de buis om eventuele resterende zouten op de buiswand te helpen wegspoelen), centrifugeer bij 12,000 rpm gedurende 30 seconden, gooi de doorstroom weg.

10. Herhaal stap 9.

11. Plaats de DNA-draaikolom in een verzamelbuis en centrifugeer gedurende 2 minuten bij 12,000 rpm.

12. Plaats de DNA-draaikolommen in een nieuwe nucleasevrije centrifugebuis van 1,5 ml en laat deze gedurende 5-10 minuten bij kamertemperatuur staan, zodat het ethanolresidu uit de DNA-draaikolom volledig kan verdampen.

13. Voeg 50-100 μl buffer TE of nucleasevrij water toe aan het midden van het membraan van de DNA-draaikolom en laat deze 5 minuten bij kamertemperatuur staan ​​(voorverwarmen van de buffer TE of nucleasevrij water op 65 °C). mate kan de elutie-efficiëntie verbeteren).

14. Centrifugeer gedurende 2 minuten bij 12,000 rpm om DNA te verzamelen. Om een ​​hogere DNA-concentratie te verkrijgen, kan de eerste doorstroom opnieuw worden toegevoegd aan de DNA-draaikolom en deze 5 minuten bij kamertemperatuur laten staan ​​en gedurende 2 minuten bij 12,000 rpm centrifugeren. Opnieuw DNA verzameld..

 

 

1. Lees vóór gebruik de producthandleiding zorgvuldig door.

2. Er moet vers materiaal worden bereid om ervoor te zorgen dat het genomische DNA niet wordt afgebroken.

3. Herhaaldelijk invriezen en ontdooien van monsters moet worden vermeden, omdat dit kan resulteren in een afname van de DNA-opbrengst.

4. Weefselmateriaal mag nooit de maximale uitgangshoeveelheid overschrijden en moet voldoende worden gelyseerd, anders kan dit de opbrengst beïnvloeden of zelfs de kolom verstoppen.

 

Alleen voor onderzoeksgebruik!

 

 

Populaire tags: weefsel / cel / bloed genomische dna-extractiekit, China weefsel / cel / bloed genomische dna-extractiekit fabrikanten, leveranciers, fabriek