SweScript RT I First Strand CDNA-synthesekit (met GDNA-verwijderaar)

 

Productnaam	Kat. Nee.	Spec.
SweScript RT I First Strand cDNA-synthesekit (met gDNA-verwijderaar)	G3331-50	50 RXN's
	G3331-100	100 rxns

 

 

De SweScript RT I First Strand cDNA Synthesis Kit is een compleet systeem voor efficiënte synthese van eerste streng cDNA uit mRNA of totaal RNA-sjablonen. Het bevat alle componenten die nodig zijn voor de synthese van de eerste streng cDNA en biedt voor uw gemak twee soorten primers voor cDNA-synthese: de Random Hexamer Primer en de Oligo (dT)18 Primer. De eerste streng cDNA die met dit systeem wordt gesynthetiseerd, kan direct als matrijs worden gebruikt in daaropvolgende PCR of real-time PCR. SweScript RT I (Reverse Transcriptase) is een mutant reverse transcriptase gebaseerd op M-MLV Reverse Transcriptase en verkregen door in vitro evolutionaire screening. SweScript RT I heeft geen RNase H-activiteit, waardoor de afbraak van RNA in de DNA/RNA-hybride matrijs tijdens de cDNA-synthesereactie van de eerste streng wordt vermeden. SweScript RT I heeft geen RNase H-activiteit, waardoor de afbraak van RNA in de eerste-strengs cDNA-synthesereactie van DNA/RNA-hybriden wordt vermeden, waardoor de hoeveelheid en lengte van de eerste-strengs cDNA-synthese wordt gewaarborgd. Vergeleken met het wildtype enzym heeft SweScript RT I de thermische stabiliteit en synthese-efficiëntie dramatisch verbeterd, en kan het op efficiënte wijze cDNA's synthetiseren in het bereik van 42-55 graad, evenals cDNA's met een lengte tot 10 kb.

 

In deze kit wordt ook de gDNA Remover meegeleverd, die snel resterende genomische DNA-verontreiniging uit RNA-preparaten kan verwijderen. Het verbetert de authenticiteit en herhaalbaarheid van de experimentele resultaten en vereenvoudigt het ontwerp van qPCR-primers zonder de noodzaak om primers over exons heen te ontwerpen.

 

 

Schip met nat ijs; Bewaren bij -20 graad, 12 maanden geldig.

 

 

Componentnummer	Onderdeel	G3331-50	G3331-100
G3331-1	SweScript RT I Enzymmixa	50 μL	100 μL
G3331-2	5×reactiebufferb	200 μL	400 μL
G3331-3	Oligo (dT)18 Primer (100 μM)	50 μL	100 μL
G3331-4	Willekeurige Hexamer-primer (100 μM)	50 μL	100 μL
G3331-5	gDNA-verwijderaar	50 μL	100 μL
G3331-6	10×gDNA-verwijderingsbuffer	50 μL	100 μL
G3331-7	Nucleasevrij water	1 ml	1 ml
Handmatig		Eén exemplaar	Eén exemplaar

a: met RNase-remmer.

b:met dNTP-mengsel en Mg²+.

 

 

1. Verwijdering van genomisch DNA

(1) Het RNA-sjabloon, Nuclease-Free Water, werd op ijs geplaatst om te ontdooien en opzij gezet;

(2) Genoomverwijderingsreactie (10 μl reactiesysteem aanbevolen):

 

Onderdeel	Volume
10×gDNA-verwijderingsbuffer	1 μL
gDNA-verwijderaar	1 μL
Totaal RNA/mRNA	0.1 ng-5 ug / 10 pg-0.5 ug
Nucleasevrij water	Voeg toe aan 10 μl

(3) Meng voorzichtig en centrifugeer kort;

(4) Incubeer gedurende 2 minuten bij 37 graden en plaats het vervolgens op ijs;

2. Synthese van cDNA van de eerste streng

(1) Er werd een omgekeerd transcriptiereactiesysteem bereid (20 μl reactiesysteem aanbevolen)

Onderdeel	Volume
Reactieoplossing voor genoomverwijdering in de vorige stap	10 μL
5×reactiebuffer	4 μL
Oligo (dT)18 Primer (100 μM)	1 μL
of willekeurige Hexamer Primer (100 μM)	of 1 μl
of genspecifieke primer (2 μM)	of 1 μl
SweScript RT I Enzymmix	1 μL
Nucleasevrij water	Voeg toe aan 20 μl

Opmerking: Voor hoge GC of complexe sjablonen, RNA-sjablonen, reverse transcriptieprimers en nucleasevrij water kunnen vooraf worden gemengd. Verwarm het RNA-primermengsel gedurende 5 minuten op 65 graden, draai kort en plaats het onmiddellijk op ijs.

(6) Meng voorzichtig en centrifugeer kort.

(7) Voer omgekeerde transcriptie uit met behulp van de onderstaande aanbevolen thermische omstandigheden:

Temperatuur	Tijd
25 graden A	5 minuten
50 graden b	{} min
85 graden	5 sec

a: Als u bijvoorbeeld de Random Hexamer Primer gebruikt, incubeer dan gedurende 5 minuten bij 25 graden en voer vervolgens de volgende stap uit. Als u ervoor kiest om Oligo (dT)18 Primer of Gene Specific Primer te gebruiken, incubeer dan direct bij 50 graden.

b: Voor GC-rijke of complexe sjablonen kan de omgekeerde transcriptietemperatuur worden verbeterd tot 55 graden.

 

 

1. Draag bij het hanteren wegwerphandschoenen om RNase-besmetting te voorkomen.

2. De producten voor omgekeerde transcriptie kunnen gedurende een korte periode bij -20 graad worden bewaard. Als langdurige opslag vereist is, wordt aanbevolen om na verpakking bij -80 graden te bewaren en herhaalde vries-dooicycli te vermijden.

3. Als de template van eukaryote oorsprong is, wordt aanbevolen om Oligo (dT)18 Primer te selecteren en deze te koppelen met de 3' Poly A-staart van eukaryoot mRNA om de hoogste opbrengst aan cDNA van volledige lengte te verkrijgen.

4. Voor reverse transcriptie van prokaryoot RNA moet Random Hexamer Primer of Gene Specific Primer worden gebruikt.

5. Random Hexamer Primer heeft een brede toepasbaarheid en is geschikt voor mRNA-, rRNA-, tRNA-, kleine RNA- en lncRNA-sjablonen.

6. Als reverse transcriptie wordt gevolgd door een qPCR-test, kunnen Oligo (dT)18 Primer en Random Hexamer Primer worden gemengd om dezelfde cDNA-synthese-efficiëntie in alle regio's van mRNA te bereiken, wat helpt de authenticiteit en herhaalbaarheid van kwantitatieve resultaten te verbeteren.

7. Als de daaropvolgende qPCR-primers over exons heen zijn ontworpen, kan de stap van het verwijderen van het genoom worden weggelaten.

 

Alleen voor onderzoeksgebruik!

 

 

Populaire tags: swescript rt i eerste streng cdna-synthesekit (met gdna-verwijderaar), China swescript rt i eerste streng cdna-synthesekit (met gdna-verwijderaar) fabrikanten, leveranciers, fabriek