IF488-Phalloidin-kleuring

 

Productnaam	Kat. Nee	Spec.
IF488-Phalloidin-kleuring	G1248-100T	100 T

 

 

Phalloidin, oorspronkelijk geïsoleerd als een bicyclisch peptide uit de giftige paddenstoel Amanita phalloides, bindt zich met zeer hoge affiniteit en specificiteit aan actinefilament F-actine, en bindt niet aan monomeer actine (G-actine). Phalloidin heeft een vergelijkbare affiniteit voor kleine en grote vezels, en bindt in wezen volgens de stoichiometrische verhouding van één actine-subeenheid tot één falloïdinemolecuul in spier- en niet-spiercellen van veel verschillende planten- en diersoorten. In tegenstelling tot actine-antilichamen verandert de affiniteit voor gemotoriseerde eiwitten aanzienlijk van de ene soort of bron naar de andere. De niet-specifieke binding van phalloïdine is vrijwel te verwaarlozen, en de verschillen tussen gekleurde en niet-gekleurde gebieden zijn zeer uitgesproken. Phalloidin en hun derivaten kunnen F-actine kleuren bij nanomolaire concentraties, waardoor zeer gemakkelijke labeling, identificatie en kwantitatieve studie van de distributie van F-actine mogelijk is.

Dit product is een fluorescerende kleurstof, IF488-gelabeld phalloidin. Volgens het gebruik van 100 μl werkoplossing per celkleuring kan dit product worden gebruikt voor kleuring van 100 cellen.

 

 

Transport met nat ijs. Bewaren op een temperatuur van -20 graden buiten het licht, 12 maanden geldig.

 

 

Onderdeel	G1248-100T
IF488-Phalloidin-kleuring	100 T
Handleiding	1 st

 

 

1. Bereid je eigen voor1 × PBS-buffer(pH 7.2-7.4, aanbevolenG4202), BSA(aanbevolenGC305010), fixatief(bevat 4% paraformaldehyde, aanbevolenG1101), filmbrekende oplossing(0.1%-0.5% Triton X-100 opgelost in PBS, aanbevolenG1204), anti-fluorescentie dovende sealer(aanbevolenG1401), gebruiksklare DAPI-kleuringsoplossing(aanbevolenG1012), enz.

2. Wanneer u dit product voor de eerste keer gebruikt, smelt het dan volledig en centrifugeer het gedurende 1 minuut op lage snelheid om verlies van de vloeistofbuiswand te voorkomen. Het wordt aanbevolen om het product te doseren in overeenstemming met de hoeveelheid die in één experiment is gebruikt om verlies van oplosmiddel door vervluchtiging te voorkomen. Bewaren op een temperatuur van -20 graden uit het licht.

3. Vóór formele experimenten werd PBS met 1% BSA bereid, dwz 1,0 g BSA werd opgelost per 100 ml PBS. Vervolgens werd 1 μl IF488-Phalloidin Stain opgezogen en gemengd met 200 μl-500 μl PBS met 1% BSA om 1x van de Phalloidin Staining Working Solution te verkrijgen. Het kleureffect kan verschillend zijn voor verschillende soorten cellen. Raadpleeg de literatuur voor de optimale kleuringswerkconcentratie of voer de pre-test uit om erachter te komen. Gebruik de Phalloidin-kleuringsoplossing op dezelfde dag waarop deze wordt bereid en bewaard bij kamertemperatuur en beschermd tegen licht.

 

 

1. Gekweekte cellen werden doorzocht (met een dichtheid van ten minste de helft van de samenvloeiing), het kweekmedium werd verwijderd en de cellen werden gewassen met 1 x PBS-buffer, voorverwarmd tot 37 graden om de cellen twee keer te wassen;

2. Fixatief met 3,0-4.0% formaldehyde werd toegevoegd om de cellen te bedekken en gedurende 15-30 minuten bij kamertemperatuur gefixeerd;

Opmerking: Methanol vernietigt actine, dus het fixeermiddel mag geen methanol bevatten en vermijd het gebruik van formaldehyde-oplossingen die methanol bevatten;

3. De cellen werden 2-3 keer gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur gewassen met 1 x PBS-buffer;

4. De cellen werden bij kamertemperatuur bedekt met PBS met 0,1% Triton X-100 en gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur gepermeabiliseerd;

5. De cellen werden 2-3 keer gedurende 10 minuten gewassen met 1 x PBS-buffer bij kamertemperatuur;

6. Nadat de celcrawls lichtjes droog geschud zijn, teken je met een pappen een cirkel zodat de cellen in het midden van de cirkel kwamen te liggen. Neem 100 μl van de kant-en-klare IF488-Phalloidin-kleuringsoplossing om de cellen volledig te bedekken, en incubeer bij kamertemperatuur en uit de buurt van licht gedurende 30-120 minuten. Houd er rekening mee dat normaal gesproken een graad van 4-37 geschikt is voor kleuring. Om te voorkomen dat de verdamping van de kleuringswerkoplossing tot droge plakjes leidt, vereist het incubatieproces dat de celkruipers in een afgesloten container worden geplaatst, zoals een lichtdichte natte doos. Bovendien kan de toevoeging van 1% BSA aan de Phalloidin-kleuringsoplossing de achtergrond effectief verminderen;

7. Cellen werden elke keer 2-3 keer gedurende 5 minuten gewassen met 1 x PBS-buffer;

8. (Optioneel)Voeg druppels kant-en-klare DAPI-kleuringsoplossing toe aan de objectglaasjes om de cellen te bedekken, en voer nucleaire kleuring uit gedurende 3-5 minuten. was de cellen 2-3 keer gedurende 30-60 s elk met 1× PBS-buffer;

9. De celcrawls werden enigszins droog geschud en omgekeerd op een objectglaasje gelegd met een druppel anti-fluorescentiedovende sealer, en de voorsealer werd afgeveegd met een papieren handdoek;

[Optionele stap]:Na het voltooien van stap 7 kan het dekglaasje ook direct worden omgekeerd op een objectglaasje dat is getitreerd met een anti-fluorescentiedovende sealer die DAPI bevat (G1407 aanbevolen), en de overtollige sealer kan vervolgens worden afgezogen. Observeer de resultaten met fluorescentiemicroscopie of laserconfocale microscopie.

10. De resultaten werden waargenomen met behulp van fluorescentiemicroscopie of laserconfocale microscopie waarbij de IF488 (Ex/Em=493/517 nm) en DAPI (Ex/Em=364/454 nm) kanalen geselecteerd waren.

 

 

1. Eén eenheid (T) fluorescent gelabeld Phalloidin wordt gedefinieerd als de hoeveelheid kleurstof die wordt gebruikt om een ​​objectglaasje met geladen cellen te kleuren.

2. Methanol kan actine-eiwit vernietigen, dus fixatieoplossing die methanol bevat, mag niet worden gebruikt bij de vroege fixatie van monsters. Het wordt aanbevolen om de fixatietijd optimaal te regelen tussen 15-30 min.

3. Phalloidin is meestal niet permeabel en wordt zelden gebruikt voor kleuring van levende cellen.

4. Alle fluorescerende kleurstoffen zijn uitgedoofd, dus het wordt aanbevolen om de detectie zoveel mogelijk op dezelfde dag na het verven te voltooien.

5. Phalloidin is giftig en moet met zorg worden behandeld. Draag tijdens de operatie een laboratoriumjas en wegwerphandschoenen.

 

Alleen voor onderzoeksgebruik!
Ver. Nee.: V1.0-202308

 

 

Populaire tags: if488-phalloidin vlek, China if488-phalloidin vlek fabrikanten, leveranciers, fabriek